Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型式糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来口内自身抗原到显现出来1M-癌症针灸呕吐的重大突破亲率在儿童时代就有很好的描绘，多个口内自身抗原中性的儿童中的有70%在血清转化后10年底患上癌症，而随访15年的儿童这一总和提高到84%。相比之下，%针灸1M-癌症一半以上的M-1M-癌症的复发机制还没获得应有的研究者。

越发多的人开始用于分期系统来定义1M-癌症的重大突破：有机棒状在显现出来多种口内自身抗原时离开第1阶段，显现出来血糖持续性时离开第2阶段，显现出来呕吐时离开第3阶段。一些多发口内自身抗原中性的有机棒状，在1期和2期，重大突破较极快，并的发展为复发的1M-癌症。我们以前描绘了一三组在首次样品到多种口内自身抗原抽样后至不算10年无癌症的极极快重大突破者，这三组病变人数不算，但形态相当明确。随后，我们发现口内自身特异性特异性CD8+T直通粒棒状重排在重大突破缓极快的病变中的大棒状上不依赖于，但在近来复发和长期依赖于的癌症病变中的很易于样品到。这显然指出，与重大突破病变相比，这些病变自身免疫重排的平衡提高。

中期研究者指出，尽管平衡性T直通粒棒状(Treg)存量长时间，但癌症病变依赖于一些功能性局限性，其中的包括对IL-2的重排能力减缓。此外，癌症病变中的的波动CD4+T直通粒棒状显然对平衡颇具抵抗性，展现为波动T直通粒棒状的抑制作用减弱，自然消除的Treg和棒状外消除的诱发Treg，以及特异性经历的CD4+T直通粒棒状中的IL-2重排减弱。本研究者的目的是描绘了CD4+平衡性T直通粒棒状(Treg)在群集极缓极快重大突破者中的的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX研究者是一项以人群为基础的横向研究者，在21岁表列出患病的病变亲属中的核对1M-癌症的危险主因。我们以前描绘了长期缓极快重大突破者的形态，他们持续保持多重口内自身抗原中性超过10年，但没显现出来癌症的针灸呕吐，极快性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名一直持续保持无癌症并愿意提供大量血液循环抽样的缓极快重大突破者划定T和B直通粒棒状功能性分析方法。在目前的研究者中的，8名极快重大突破者(SP三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身抗原中性。所有的参加者都东南面1M-癌症重大突破的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗原对某些特异性的中性重排，然而，一名病变已经东南面2期至不算6年，但没显现出来针灸呕吐，一名病变被诊断为癌症，该人脑72岁，在挖掘出实验抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在分析方法中的对该小分长子顺利进行了单独指标。受控外周血单个氢直通粒棒状(PBMCs)，采用多参数流式直通粒棒状奥义和T直通粒棒状抑制作用试验车指标小分长子中的Treg的频亲率、表M-和功能性。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无监督聚类分析方法，指标Treg表M-。

结果：与心理健康小分长子相比，来自极快重大突破棒状的梦境CD4+T直通粒棒状的监督聚类看出，应答的梦境CD4+ Treg频亲率提高，与免疫抑制作用诱发的TNFR特别蛋白(GITR)理解提高有关。一名HbA1c升高的病变与重大突破缓极快者和匹配的对照三组相比，Treg谱有所不同。功能性已经有，与心理健康小分长子相比，来自缓极快重大突破棒状的Treg介导的CD4+波动T直通粒棒状抑制作用明显受损。展现为对波动CD4+T直通粒棒状CD25和CD134理解的抑制作用提高。

左图1 深入的表M-分析方法看出，CD4+Treg亚M-在极快重大突破队列中的提高。由FlowSOM生成的Treg一楼，聚集在来自所有小分长子的活CD4+CD45RA -直通粒棒状上。根据上面物理解鉴定出10个元簇:梦境T直通粒棒状_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T直通粒棒状;HLA-DR + GITR +梦境T直通粒棒状;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用于9个不同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个端口代表一个协同(100个协同)，更多的元协同(10个元协同)在端口三组周遭上色。每个端口中的的煎饼左图声称单个上面的理解档次。(b)每个元聚类的热左图，以看出整棒状上面理解。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成左图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的沙质。(e-l)相较重元素为每个metacluster木箱直通左图(重元素> 0.05%)确定为HD和SP三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T直通粒棒状(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T直通粒棒状(l)。深浅蓝色圆点代表慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用于CITRUS的预测模M-证实，Treg频亲率的提高是重大突破缓极快的标识。分级门控(a - f)和橄榄分析方法(g-k)较为SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T直通粒棒状上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利进行受控，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)三组以及小分长子SP 606(深浅蓝色)中的CD25+ cd127的频亲率概要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控同构的木箱直通左图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，上标出彩的簇被识别系统为SP和HD队列之间的不同。(j)木箱直通左图看出了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组中的，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相较重元素(总和)。(k)直方左图看出每个簇的表M-(粉红色)和Treg上面相较理解与氛围理解(浅蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面一路上，寄存器Treg_4。氛围与所有其他簇中的上面的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查

左图3 与心理健康献血者相比，重大突破缓极快者梦境treg的GITR提高。每个梦境CD4+T直通粒棒状元簇(梦境T直通粒棒状_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T直通粒棒状;HLA-DR + GITR +梦境T直通粒棒状;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个理解上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热左图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深浅蓝色)的FlowSOM GITR理解结合，看出直方左图(c)和概要左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和核查，p< 0.07(深浅蓝色)所有小分长子包括，p< 0.05(浅蓝色)小分长子SP 606和匹配的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深浅蓝色)结合，看出直方左图(e)和概要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核查

左图4 来自缓极快重大突破的CD4+ treg直通粒棒状控制波动CD4+T直通粒棒状的能力减缓。SP三组用浅蓝色的直通和圆点声称，HD三组用蓝色的直通和圆点声称，深浅蓝色的直通/圆点声称小分长子sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒棒状顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被上面为CFSE, Treg按仔细观察的总和氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生直通粒棒状，培训3翌日顺利进行流式直通粒棒状奥义样品。(a-d)与CD4+需要的话者相较应以的treg培训(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用总和。用于中性对照(应答的响应以直通粒棒状不含treg)计算抑制作用总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

左图5 波动CD4+T直通粒棒状对缓极快重大突破的T直通粒棒状再生的抑制作用更敏感。SP三组用浅蓝色的直通和圆点声称，HD三组用蓝色的直通和圆点声称，深浅蓝色的直通/圆点声称小分长子sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒棒状顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel上面，treg按仔细观察的总和氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生直通粒棒状，培训3翌日顺利进行流式直通粒棒状奥义(CD25反染)和直通粒棒状因长子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者协同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用次之(b)。(c,d) CD25抑制作用次之(c)和CD134抑制作用次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中的的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论点：我们推论的论点是，来自缓极快重大突破长子的再生梦境CD4+Treg在GITR理解中的获得了扩张和珍贵，合理化了全面研究者Treg在1M-癌症显然性有机棒状中的的一般而言的必要。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28